自制血清替代物

更新时间：2024-11-24 13:05:16

　　目的：建立一种人表皮干细胞的无血清培养方法，并与目前表皮干细胞常用的有血清培养方法进行比较，探讨该条件是否更适合表皮干细胞的生长和有利于实施表皮干细胞的调控，提高实验的准确性。方法：实验于2002-05／200

　　【文摘】目的：建立一种人表皮干细胞的无血清培养方法，并与目前表皮干细胞常用的有血清培养方法进行比较，探讨该条件是否更适合表皮干细胞的生长和有利于实施表皮干细胞的调控，提高实验的准确性。方法：实验于2002-05／2004-07在江西医学院第二附属医院医学分子中心完成。①从幼儿包皮中分离表皮细胞、用胶原Ⅳ分别黏附表皮细胞10～15min，收集黏附细胞，即为纯化的表皮干细胞。②分3组进行培养，3组培养条件均有无钙低糖Dulbecco改良的Eagle培养基，0．05mmol／LCaCl2，10μg／L表皮细胞生长因子，1×10^-6mol／L氢化可的松；有血清培养组还含有100g／L螯合钙的干细胞专用血清；无血清培养组1还含有100g／L无血清培养基血清替代物。无血清培养组2还含有100g／L无血清培养基血清替代物和50μg／L牛垂体提取物。③培养20d后。在倒置显微镜下对所培养细胞进行形态学观察；同时计数细胞数（大于100个细胞团为1个集落称克隆），计数各组克隆数；采用胰酶消化传代，计数传代数及多次传代后所得细胞总数；流式细胞术分析α6，CD71（人表皮干细胞表面标记）的表达情况，计算人表皮干细胞α6briCD71dim细胞百分率；采用流式细胞术进行细胞周期分析处于静止期／DNA合成前期人表皮干细胞百分率，采用免疫组化法鉴定细胞角蛋白19及5／8（均表明人表皮干细胞生长情况，且以角蛋白19更能明确表明人表皮干细胞生成情况）和角蛋白10表达情况。结果：①人表皮干细胞细胞形态学观察结果：应用倒置显微镜下观察检测，无血清培养组1与有血清培养组人表皮干细胞细胞形态学基本相同，无血清培养组1集落形成时间稍晚于有血清培养组。②形成的克隆数及经胰酶消化可传代数、细胞总得数：胰酶消化传代后，形成的克隆数、细胞总得数及细胞传代数无血清培养组1与有血清培养组相近（P>0．05），两组形成的克隆数、细胞总得数明显低于无血清培养组2

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